Гістологія
Надано лабораторією кафедри патології медичного факультету Університету Рібейрау-Прету (Бразилія) - USP
01
Група
Дослідження
Кількість, N= 29 лабораторних щурів Вістер
Вага : 421 г
Походження тварин : Biotério Central of Campus of Ribeirão Preto of São Paulo University
Підтримка : Experimental Pathology Lab of Pathology Department on Medicine School of Ribeirão Preto – USP
Утримання тварин : поліпропіленові бокси
Їжа тварин : базова лабораторна дієта та вода
Показники освітлення : природні світло/темрява цикли при контрольованих основних умовах
Еспериментатори : A.Tenenbaum,R.Mené,Kim
02
Препарація Тварин та Гістологічні Зразки
Мишей евтаназували в CO2-камерах.
- Розріз шкіри лезом № 23
- Знаходження та виділення претибіального м'яза за допомогою ножиць Метценбаума
- Перетин сухожиль ножицями Майо.
- Фіксація частин м'язів на зрізах коркового дуба
- Закріплення з використанням 50% розчину формальдегіду - 10% буферу і 50% чистого парафіну для звичайного оптичного мікроскопічного дослідження.
- Фарбування зрізів як рутинний гістологічний процес.
- Використаний мікротом: Leika RM 2155
- Забарвлення зрізів м'язів за допомогою:
-гематоксилін-еозин
-Трихромія Массона
-і червоний пікро-сіріус.
- Гістологічне дослідження проводили за допомогою звичайного мікроскопа (Olympus BH-2).
- Спостереження під поляризованою лампою
- Фотодокументація здійснювалася за допомогою мікроскопа Leika DMR, з'єднаного з цифровою фотокамерою Leika CD 300F і сумісним комп'ютером.
03
Матеріал
- Тварин розділили по 6 ящиках таким чином, щоб у ящиках з номерами від 1 до 5 було по 5 щурів, а в ящику під номером 6 - 4 щури.
- Усім тваринам проводили оцінку ходи за відбитком сліду на спеціальному папері та попереднім зануренням задніх лап у мильний розчин.
- В боксі 1 була контрольна група, яка отримувала аплікацію 0,1 мл фізіологічного розчину (NaCl 0,9%) на правий претибіальний м'яз.
-
Миші з боксів 2-5 отримували 0,1 мл основного продукту Endopeels Original на той самий м'яз, що й контрольна група.
-
У боксі 6 було 4 щури, кожному з яких підшкірно вводили по 0,5 мл основного продукту Endopeels.
-
All the animals were submitted to walking evaluation before and after their respective injections.
04
Методи
05
Контроь
Коментар: Нічого декларувати після введення фізіологічного розчину
Л: Претибіальний м'яз - без лікування
П: Претибіальний м'яз - після 0,1 мл NaCl 0,9% в/м
06
10 днів після ін'єкції Ендопіл
Через 10 днів після ін'єкції Ендопіл 0,1 мл в правий претибіальний м'яз.
Тут можна побачити утворення вакуолей, які оточені лімфоцитами. Вакуолі відрізняються від некрозу тканини. Присутність лімфоцитів пов'язана з проникністю клітинних мембран.
Л : Контроль -100x 10 днів
П:100x10 днів
П :200x10 днів
П :400x10 днів
07
1 місяць після ін'єкції Ендопіл
Через 1 місяць після ін'єкції Ендопілу 0,1 мл у правий претибіальний м'яз.
Те, що видно на знімках чорним кольором, не є некрозом, як можуть собі уявити деякі науковці!
Насправді, слід взяти до уваги 4 висновки
- артефакт забарвлення
- відсутність некрозу
- апоптоз
- біорегенеративний процес
Л : Контроль-100x30 днів
П:100x30 днів
П :400x30 днів
08
3 місяці після ін'єкції Ендопіл
Через 3 місяці (90 днів) після ін'єкції Ендопіл 0,1 мл в правий претибіальний м'яз.
Л : Контроль-100x90 днів
П:100x90 днів
09
7 місяців після ін'єкції Ендопіл
7 місяців (210 днів) після ін'єкції 0,1 мл Ендопіл в правий претибіальний м'яз.
Повна Restitutio ad integrum через 7 місяців
L : Контроль-100x210 днів
П:100x210 днів
Л :Контроль 50x210 днів
П:50X-210 днів
10
Ін'єкція Ендопіл в підшкірну клітковину
0,5 мл (5x 0,1 мл) підшкірна ін'єкція Ендопіл в праву підшкірну претибіальну ділянку.
Л:200x-Контроль-ПШ
П-10днів-ПШ-200X
П-30днів-ПШ-200X
П-90днів-ПШ-200X
П-210днів-ПШ-200X
П-210днів-ПШ-400X
-
- Ендопіл викликає селективний оборотний міофіброліз і запальну реакцію протягом 1 місяця, приблизно
-
- М'язові зміни є оборотними майже в повному обсязі
-
- М'язи є кращим місцем для ін'єкції Ендопіл через більшу ефективність, контрольованість і тривалість його дії
-
- В ході дослідження не було виявлено жодного некрозу чи абсцесу.